通用PCR試劑盒適用于各種RNA制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。通用PCR試劑盒它采用M-MLV進行反轉錄反應,能夠獲得較長的反轉錄產(chǎn)物。
因快速靈敏檢測通用具有重要意義,本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù)PCR原理開發(fā)的試劑盒。
通用PCR試劑盒具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增通用,與其他植物沒有交叉反應。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCRmix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做40μL體系的PCR50次,但只能用于科研。
通用PCR試劑盒PCR常見的問題及原因:
一、產(chǎn)生彌散條帶:
1、在PCR反應體系中一鏈產(chǎn)物的含量過高
2、減少引物的用量
3、優(yōu)化PCR反應條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4、在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時,其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴增,一般會顯示為彌散背景。
3、由于mRNA剪切方式的不同,根據(jù)選擇引物的不同將導致產(chǎn)生不同的RT-PCR結果。
二、產(chǎn)生非特異性條帶:
1、用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結果也顯示同樣條帶,則需要用DNaseI重新處理樣品。
2、在PCR反應中,非特異的起始擴增將導致產(chǎn)生非特異性結果。在低于引物Tm2至5℃的溫度下進行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結果的產(chǎn)生。
三、產(chǎn)生大分子量的彌散條帶:
1、大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2、對于長片段的PCR,建議將反應體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200)
四、在無反轉錄酶的情況下,對照RNA獲得擴增結果。